甲基丙烯酸环氧丙酯诱导16HBE细胞恶性转化过程中细胞凋亡相关lncRNA的筛选及功能研究

摘要：

目的:筛选在甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导人支气管上皮16HBE细胞恶性转化过程中凋亡相关lncRNA,并探讨其对细胞恶性转化的3个时期细胞凋亡的调控作用.方法:取处于对数生长期的16HBE细胞,二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂对照,终浓度为8μg/mL的GMA为处理组,每次染毒72 h,重复染毒3次后,分别进行传代培养.收集GMA染毒组和DMSO对照组的第10、20和30代细胞,基于细胞转化表型鉴定结果,将其分为转化前、中和后期.流式细胞术检测3个时期的细胞凋亡率,lncRNA表达谱芯片筛选3个时期细胞凋亡相关差异表达lncRNAs,生物信息学数据库预测差异lncRNA可能的作用靶基因.实时荧光定量PCR验证筛选出的差异lncRNA相对表达水平.结果:与同时期DMSO对照组相比,第10代GMA染毒组的细胞凋亡率明显升高,第20代GMA染毒组的细胞凋亡率降低(均为P<0.05),第30代GMA染毒组的细胞凋亡率与同时期的DMSO对照组相比差异无统计学意义.芯片筛选结果发现,lncRNA CFLAR-AS1在第10、20和30代分别下调22％、上调244％和下调30％,其可能靶基因CFLAR的mRNA分别上调27％、下调30.6％和下调31％.lncRNA CFLAR-AS1的qPCR验证结果与芯片筛选结果一致,与同时期的DMSO对照组相比,第10、20和30代的GMA染毒组细胞分别下调42％、上调442％和下调9％,其中第10和20代细胞与对照组间的差异具有统计学意义(P<0.05).结论:在GMA诱导16HBE恶性转化过程中,转化前期凋亡率升高,转化中期凋亡率下降,这一时期lncRNA CFLAR-AS1可能发挥抑制细胞凋亡的作用,但其作用机制还有待进一步研究.

关键词：甲基丙烯酸环氧丙酯、人支气管上皮细胞、细胞恶性转化、细胞凋亡、长链非编码RNA

所属期刊栏目：33

分类号：R114(卫生基础科学)

资助基金：国家自然科学基金81673221

在线出版日期：2021-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

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