组蛋白H3(Ser10)磷酸化在维持肿瘤细胞恶性表型中的作用

摘要：

目的:探讨组蛋白H3(Ser10)磷酸化在维持肿瘤细胞恶性表型中的作用.方法:采用蛋白质印迹法检测肝癌细胞株HepG2、Bel7402、SMMC-7721及人正常肝细胞L02株中H3(Ser10)的磷酸化水平,构建H3(Ser10)低磷酸化修饰突变型细胞株,通过软琼脂克隆形成试验检测下调H3(Ser10)磷酸化对肿瘤细胞恶性表型的影响.采用蛋白印迹检测改变H3(Ser10)磷酸化水平对蛋白磷酸酶2A的调控基因IGBP1(α4)表达的影响,并利用生物信息学预测IGBP1基因启动子区AP-1位点.在Bel7402和A549细胞株上构建稳定高表达AP-1和H3(Ser10)磷酸修饰位点突变型细胞株,采用双荧光素酶报告系统验证p-H3(Ser 10)对α4的转录调控作用.结果:与对照组相比,肝癌细胞株中H3(Ser10)磷酸化的表达水平增加2.61倍(P＜0.05),同时发现具有癌基因功能的α4蛋白表达也上调2.0～6.3倍(P＜0.05).H3(Ser10)位点突变的Bel7402细胞(Bel-H3S10A)中H3(Ser10)磷酸化水平明显下降,在软琼脂上形成的克隆数量减少30％.氯化镉明显诱导p-H3(Ser10)磷酸化和α4的表达(P＜0.05),且具有剂量-反应关系,提示H3(Ser 10)磷酸化可能调控α4的表达.生物信息学预测发现IGBP1启动子区存在多个AP-1的结合位点.双荧光素酶报告试验结果显示,A549-AP-1-H3S10A(S10A)细胞株中H3(Ser10)磷酸化水平降低,在氯化镉处理下,α4的蛋白表达水平下降了47％(P＜0.05).结论:组蛋白H3(Ser10)磷酸化在维持肿瘤细胞的恶性表型中起作用,可能是通过激活转录因子AP-1进而调控促癌因子α4的表达实现的.

关键词：H3(Ser10)磷酸化、α4、肿瘤细胞、恶性表型

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分类号：R114(卫生基础科学)

资助基金：中山大学高校基本科研业务费医科青年培育项目17ykpy13;国家自然科学基金青年项目31401213

在线出版日期：2018-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：81-86,91