SREBP-1c基因过表达细胞模型的构建及对HepG2细胞脂滴含量的影响

摘要：

目的:构建SREBP-1c过表达HepG2细胞模型并观察其对脂滴含量的影响,为进一步深入研究肝癌脂滴代谢异常机制提供细胞模型.方法:采用DNA重组技术,将SREBP-1c基因克隆至慢病毒表达载体pLenti 6.3/V5中,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带目的基因的质粒pLenti6.3-SREBP-1c共转染293T细胞,收集上清,感染HepG2细胞.通过Real-time PCR和Western blot对细胞株进行鉴定.采用免疫荧光检测HepG2细胞中脂滴的数量、大小及细胞内甘油三酯的含量.结果:成功构建了过表达SREBP-1c基因的慢病毒载体pLenti6.3-SREBP-1c,转染后HepG2细胞中可见明显的SREBP-1c蛋白表达.Real-time PCR检测结果显示转染SREB P-1c基因的HepG2细胞中SREBP-1c mRNA水平较对照组升高了约11.4倍.Western blot结果显示SREBP-1c蛋白水平较对照组提高3.2倍.免疫荧光显示过表达SREBP-1c能够明显增加HepG2细胞内脂滴的数量和大小.细胞内甘油三酯定量结果显示甘油三酯含量较对照组明显升高(P＜0.01).结论:成功构建了,REBP-1c基因过表达的重组慢病毒载体及其稳定转染细胞株.高表达SREBP-1c的HepG2细胞增加了细胞中脂滴的数量、大小和甘油三酯的含量,可用于从脂滴代谢方面对肝癌发病分子机制的研究.

关键词：SREBP-1基因、慢病毒载体、人肝癌细胞HepG2、基因转染、脂滴

所属期刊栏目：30

分类号：Q291

资助基金：国家自然科学基金项目81700766

在线出版日期：2018-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：14-19