蛋白激酶C和JNK在溶血磷脂酸诱导人肺成纤维细胞MCP-1表达中的作用

摘要：

目的:研究蛋白激酶C(PKC)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)在溶血磷脂酸(LPA)诱导人肺成纤维细胞(HLF-1)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达中的作用.方法:培养HLF-1细胞,以不同浓度(0、1、3和10 μmol/L)的LPA处理细胞不同时间(0.5、6、12和24h)后,ELISA检测细胞培养基上清液中MCP-1的蛋白表达,荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA的表达水平.用不同浓度的PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I(0、0.1、l和10 μmol/L)或JNK抑制剂SP600125(0、0.1、1和10 μmol/L)预孵育细胞30 main后,用LPA(10 μmol/L)刺激2或6h后,ELISA方法检测细胞培养基上清液中MCP-1的蛋白表达,荧光定量PCR检测MCP-1mRNA的表达水平.用PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I(1 μmol/L)预孵育30 min,以浓度为10 μmol/L的LPA处理细胞不同时间(0、5、30和60 min)后,Western blot检测c-Jun蛋白磷酸化水平.结果:LPA可诱导HLF-1细胞MCP-1蛋白释放,并呈剂量效应和时间效应关系.LPA的浓度为10μ.tmol/L时,HLF-1细胞释放MCP-1蛋白的量是对照组的2.4倍(P＜0.05);细胞在LPA处理24h后,MCP-1蛋白的释放量较对照组增加约1倍(P＜0.05).LPA可诱导HLF-1细胞MCP-1 mRNA的表达并呈时间效应,LPA处理2h后,MCP-1 mRNA表达水平是对照组的5.3倍(P＜0.05).PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I和JNK抑制剂SP600125均可显著抑制LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1 mRNA表达及MCP-1蛋白释放.Bisindolylmaleimide I的浓度为1μmol/L时可阻断LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1蛋白释放量的60％(p＜o.05),浓度为3μmol/L时对MCP-1 mRNA表达有明显抑制效果,抑制率达40％(P＜0.05);而SP600125的浓度为1μmol/L时可阻断LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1蛋白释放量的78％(P＜0.05),对MCP-1 mRNA表达有明显抑制效果,抑制率达87％(P＜0.05).10 μmol/L的LPA可显著诱导HLF-1细胞c-Jun磷酸化,同时PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I(1 μmol/L)可显著抑制LPA(10 μmol/L)诱导的HLF-1细胞c-Jun磷酸化.结论:PKC与JNK通路均参与LPA诱导HLF-1细胞MCP-1的表达.

关键词：溶血磷脂酸、蛋白激酶C、c-Jun氨基端激酶、单核细胞趋化因子-1、人肺成纤维化细胞

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分类号：R329.2(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金项目81370160;厦门大学中央高校基本业务费专项资金项目20720160053;福建省自然科学基金青年项目2015J05171;福建省卫生系统中青年骨干人才培养项目2015-ZQN-ZD-35;厦门市科技惠民计划项目3502220154072

在线出版日期：2017-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：31-36