Metridia荧光素酶检测条件的优化

摘要：

目的:探讨培养基pH、血清对Metridia荧光素酶(MLuc)检测的影响并尝试找到一种优化的检测条件.方法:构建表达MLuc的逆转录病毒载体,瞬时转染人官颈癌细胞系HeLa,制备收获MLuc;利用化学发光仪检测不同条件下的培养基对MLuc发光性能的影响,并尝试通过不同缓冲液与试剂的组合代替培养基来获得最佳条件.结果:培养基pH变化导致MLuc发光值产生较大波动,血清的存在会导致检测背景;添加0.02％(V/V)NP-40的磷酸盐缓冲液(PBS)(pH=7.4)作为MLuc检测的缓冲体系代替培养基,其发光值大小相当,检测背景值由原来的600左右降低到20左右.结论:以添加0.02％ NP-40的PBS作为MLuc检测的缓冲体系可消除培养基pH、血清的影响,使检测结果更加准确和灵敏.

关键词：荧光素酶、pH、血清、检测、优化

所属期刊栏目：28

分类号：Q819(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金31170829,81171762,81550017,81473418;中国中医科学院自主选题项目ZZ2015015

在线出版日期：2017-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：438-442