叔丁基过氧化氢诱导人正常肝细胞系L02自噬模型的建立及其线粒体应激机制

摘要：

目的:建立叔丁基过氧化氧(t-BHP)诱导的人正常肝细胞系L02自噬模型并探讨其中的线粒体应激机制.方法:体外培养L02细胞,用不同浓度(100、200、400、800、1000μmol/L)t-BHP及线粒体靶向抗氧化剂MitoQ或p38/MAPK特异性抑制剂SB203580进行处理,采用免疫荧光和Western blot检测自噬标志蛋白LC3-Ⅱ和p62蛋白水平,以及p38/MAPK信号通路的激活情况;Mito-SOXRed染色流式法检测细胞线粒体活性氧(ROS)水平.结果:免疫荧光结果显示t-BHP剂量≥800 μmol/L时可明显诱导L02细胞内LC3-Ⅱ发生聚集.Western blot结果显示,与对照组比较,800和1 000 μmol/L t-BHP处理可显著增加LC3-Ⅱ蛋白水平,并降低p62蛋白水平(P均＜0.05).同时线粒体ROS水平在≥400 μmol/L t-BHP处理后明显升高,在1000μmol/L t-BHP处理后p38蛋白磷酸化水平显著增加(P均＜0.05).给予线粒体靶向抗氧化剂MitoQ或p38/MAPK特异性抑制剂SB203580预处理后可有效拮抗t-BHP(1000μmol/L)处理引起的LC3-Ⅱ和p62蛋白水平改变.结论:我们成功建立了t-BHP诱导体外培养人正常肝细胞系L02的自噬模型,证明线粒体ROS介导了此过程的发生,同时p38/MAPK通路在此过程中发挥了重要作用.

关键词：叔丁基过氧化氢、自噬、线粒体、活性氧、p38/MAPK

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分类号：R114;R992(卫生基础科学)

资助基金：国家自然科学基金81270417,31070766,30300074;陕西省青年科技新星人才基金2010KJXX-06

在线出版日期：2016-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：91-96