APOBEC-3F和APOBEC-3G与乙肝核心抗原的相互作用研究

摘要：

目的：人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽APOBEC-3F(A3F)和APOBEC-3G(A3G)可抑制HBV复制，并参与HBV基因组的超突变，其中HBcAg被认为是潜在作用位点，为此本文研究A3F和A3G与HBcAg可能存在的蛋白相互作用方式。方法：RT-PCR克隆人A3F和A3G的cDNA，并构建相应酵母双杂交表达载体pGADT7-A3F/-A3G；PCR克隆HBV ayw亚型HBcAg基因，构建其酵母双杂交表达载体pGBKT7-HBcAg。pGBKT7-HBcAg分别与pGADT7-3G和pGADT7-3F共转化AH109酵母菌，利用营养二缺平板及四缺平板培养及α-半乳糖苷酶活性测试，检测HBcAg与A3F和A3G的直接作用情况。构建含有HBcAg、人A3F和A3G基因的多种标签融合真核表达质粒，脂质体法转染HeLa细胞后进行免疫共沉淀实验(Co-IP)，并通过Western blot检测免疫共沉淀产物确定HBcAg与A3F和A3G之间是否存在间接相互作用。结果：酶切及DNA测序分析表明成功克隆HBcAg、人A3F和A3G，并成功构建酵母双杂交、真核表达及亚细胞定位相关的表达质粒。通过酵母双杂交实验对α-半乳糖苷酶定性和定量检测显示，A3F和A3G与HBcAg无显著的直接相互作用。Western blot及Co-IP实验结果表明A3F和A3G与HBcAg均存在相互作用。结论：A3F和A3G蛋白与HBcAg蛋白之间确实存在相互作用，推测这种作用不是通过两个蛋白直接结合实现的。

关键词：APOBEC-3F、APOBEC-3G、乙肝核心抗原、酵母双杂交、免疫共沉淀

分类号：Q344(遗传学分支学科)

资助基金：国家自然科学基金31170852，81001322，81172795；广东省优秀青年教师培养计划Yq2013077

在线出版日期：2015-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：182-186