SET基因shRNA慢病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达鉴定

摘要：

目的:构建SET基因shRNA慢病毒表达载体,为研究SET在三氯乙烯毒性机制中的作用提供技术支持.方法:通过NCBI检索SET序列,设计合成5对shRNA片段,退火后连接到慢病毒载体pLVX-shRNA1 vector.挑取筛选的单菌落,经PCR和测序鉴定后提取质粒.将质粒共转染到293T细胞,收集病毒上清,转导入L-02肝细胞中,利用嘌呤霉素筛选得到SET缺陷型细胞,最后利用荧光定量PCR和Western blot鉴定干扰效果.结果:PCR和测序结果证明双链shRNA正确插入慢病毒载体pLVX-shRNA1vector,共转染293T细胞得到高滴度病毒,转导L-02细胞筛选出SET基因缺陷型细胞.结论:利用慢病毒介导的RNAi技术成功构建了SET基因缺陷型细胞.

关键词：SET、RNA干扰、慢病毒、载体

所属期刊栏目：25

分类号：Q782;Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81273126,30972454;深圳市重点实验室提升发展项目CXB201005260068A

在线出版日期：2013-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：44-47,52