三氯乙烯对CYP1A2高表达肝细胞株凋亡基因和癌基因的影响

摘要：

目的:构建CYP1A2基因高表达载体,转染到L02肝细胞,建立CYP1A2高表达细胞株并检测三氯乙烯对该细胞株凋亡基因和癌基因的影响.方法:根据GenBank提供的CYP1A2基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒高表达载体pLVX-acGFP1-C1中,将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞.用嘌呤霉素进行筛选得到CYP1A2高表达L02细胞株,通过荧光定量PCR和Western blot对细胞株进行鉴定.用不同剂量三氯乙烯对正常L02肝细胞和CYP1A2高表达细胞进行染毒12h,采用PCR方法检测凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)mRNA表达的变化.结果:测序证明重组慢病毒高表达载体CYP1A2基因序列与GenBank提供的CYP1A2序列一致,荧光定量PCR检测显示CYP1A2高表达细胞株CYP1A2 mRNA表达比正常L02肝细胞提高317倍,Western blot结果显示CYP1A2高表达细胞株CYP1A2蛋白表达水平比正常L02肝细胞高3.41倍.三氯乙烯染毒后,CYP1A2高表达细胞中凋亡基因Bcl-2 mRNA表达水平与正常肝细胞无显著性差异(P＞0.05),而Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达水平高于正常肝细胞(P＜0.05或P＜0.01).CYP1A2高表达细胞中癌基因c-myc和p53 mRNA表达水平低于正常肝细胞(P＜0.05或P＜0.01),而c-fos和K-ras mRNA则高于正常肝细胞(P＜0.05或P＜0.01).结论:三氯乙烯对CYP1A2高表达细胞凋亡基因和癌基因表达有显著影响,提示CYP1A2是三氯乙烯在体内代谢的重要因素,与三氯乙烯毒性存在一定关系.

关键词：肝细胞、CYP1A2、慢病毒载体、三氯乙烯、凋亡基因、癌基因

所属期刊栏目：25

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：深圳市科技计划重点项目201101015;深圳市重点实验室提升发展项目CXB201005260068A

在线出版日期：2013-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：7-12,17