放线菌素D处理V79细胞的条件培养液对旁观者细胞p53mRNA和蛋白表达及细胞周期的影响

摘要：

目的:观察放线菌素D (actinomycin D,ACTD)处理V79靶细胞获得的条件培养液(conditioned medium,CM)对V79旁观者细胞p53 mRNA和蛋白表达及细胞周期的影响,以研究ACTD诱导旁观者效应发生的可能机制.方法:4.0 mg/L ACTD处理V79靶细胞1h,PBS洗3次,加入新鲜培养液后开始计时,分别在第4、8、12和24h获取靶细胞不同时段的CM.用不同时段CM培养正常V79细胞24h后,分别采用RT-PCR检测旁观者细胞中p53的mRNA水平；免疫组化法检测p53蛋白的表达；流式细胞术测定旁观者细胞的细胞周期分布.结果:与对照组比较,p53 mRNA水平在4、8和24 h CM处理组均增加(P＜0.01),在4～12 h CM时段,p53mRNA水平随着时段的延后呈逐渐降低趋势,12h组降至最低,与阴性对照的水平接近(P＞0.05).各CM处理组p53蛋白平均灰度值和移分光密度,除12 h CM组外均较对照组显著增加(P＜0.05).随着时段的延后(4～12 h),p53蛋白表达逐渐减少,12h组降至最低,与阴性对照间的差异无统计学意义(P＞0.05),p53蛋白表达与p53 mRNA表达结果一致.不同时段CM处理组旁观者细胞G0/G1期比阴性对照组增多(P＜0.05),4hCM组增加最明显；各CM处理组S期细胞均较阴性对照组减少(P＜0.01),但组间差异无统计学意义(P＞0.05)；而G2/M期细胞在4hCM组下降明显,与阴性对照间的差异有统计学意义(P＜0.01); 8～12 h逐渐增加,12h组接近对照水平(P＞0.05); 24h又下降,与阴性对照间的差异有统计学意义(P＜0.01).结论:ACTD诱导旁观者效应可能是通过靶细胞的CM影响旁观者细胞p53 mRNA和蛋白的表达,并影响细胞周期的进展而引起的,以4hCM诱导的效应最强.

关键词：放线菌素D、条件培养液、p53、细胞周期

所属期刊栏目：24

分类号：R114(卫生基础科学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30471475

在线出版日期：2013-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：436-439