CYP2E1基因RNA干扰载体的构建与表达

摘要：

目的:构建CYP2E1基因shRNA慢病毒表达载体,为研究CYP2E1在药物代谢和环境污染物代谢中的作用提供技术支持.方法:通过NCBI检索CYP2E1序列,设计合成3对shRNA片段,退火后连接到慢病毒载体PLKO.1-puro,将重组质粒转化到感受态JM107中.挑取筛选的单菌落,经PCR和测序鉴定后提取质粒.将质粒和包膜蛋白质粒共转染到293FT细胞,收集病毒上清,转导肝细胞L02,利用嘌呤霉素筛选得到CYP2E1缺陷型细胞,最后利用荧光定量PCR和Western blot鉴定干扰效果.结果:PCR和测序结果证明双链shRNA已经正确插入慢病毒载体PLKO.1-puro,共转染293FT细胞得到高滴度病毒,转导L02细胞筛选出CYP2E1 基因沉默细胞,荧光定量PCR检测shRNA3的最高抑制效率为86.9％,Western blot鉴定shRNA3基本无CYP2E1表达.结论:利用慢病毒介导RNAi技术成功构建了CYP2E1基因沉默细胞.

关键词：CYP2E1、RNA干扰、慢病毒、载体

所属期刊栏目：24

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：深圳市科技计划项目20ll01015

在线出版日期：2012-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：290-294