人细胞周期素D1和B1真核表达载体的构建及对HeLa细胞的转染

摘要：

目的:构建人细胞周期素cyclin D1和cyclin B1的真核表达载体,并将其瞬时转染到HeLa细胞株中.方法:以HeLa细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增cyclin D1和cyclin B1基因编码的cDNA,并将扩增的cDNA片段插人p3XFLAG-CMV(TM)-14真核表达载体,分别构建p3XFLAG-cyclin D1和p3XFLAG-cyclin B1重组质粒,重组子经酶切分析和测序鉴定后,用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的表达载体转染HeLa细胞,用Western-blot技术检测细胞中FLAG融合蛋白的表达.结果:经酶切鉴定和Western印迹分析证实人cyclin D1和cyclin B1的真核表达载体构建成功,并能在瞬时转染的HeLa细胞中表达分子量大小相符的重组蛋白.结论:成功构建了人cyclin D1和cyclin B1的真核表达载体,为两种细胞周期素及其相关蛋白的功能研究奠定了基础.

关键词：细胞周期素、载体构建、瞬时转染、真核表达

所属期刊栏目：23

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30760057;云南省科技计划项目2008CC003

在线出版日期：2011-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：330-334