哺乳动物细胞CDK2系列表达载体的构建与表达

摘要：

目的:构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)在哺乳动物细胞的表达载体,为研究CDK2的功能和修饰提供实验材料.方法:从食管癌细胞中提取总RNA,逆转录PCR扩增CDK2编码区,然后将PCR产物克隆到T载体；扩增后的CDK2片段分别亚克隆入pcDNA3、pcDNA4、pNTAP和pEGFP等4种哺乳动物表达载体；最后,将获得的表达载体PEGFP/CDK2转染小鼠成纤维细胞NIH3T3进行初步的CDK2表达分析.结果:RT-PCR扩增获得约900 bp的目的片段,经T载体克隆和DNA序列分析,显示重组片段是人CDK2基因序列；CDK2片段分别亚克隆入上述4种载体后获得相应表达载体；运用构建的PEGFP/CDK2表达载体,在NIH3T3细胞中表达出CDK2蛋白.结论:成功构建了CDK2的哺乳动物细胞系列表达载体,并在NIH3T3细胞中成功表达目的蛋白.

关键词：CDK2、基因克隆、真核表达载体

所属期刊栏目：23

分类号：Q71;R73-3(生物大分子的结构和功能)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目31000347;国家自然科学基金-广东联合基金项目U0932001

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：245-249