A549和MDCK细胞外源性表达人APOBEC-3F和APOBEC-3G对流感病毒复制和突变的影响

摘要：

目的:研究人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽-3F(human apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic-polypeptide 3F,hA3F)和hA3G对流感病毒的复制和突变的影响.方法:外源性hA3F和hA3G通过脂质体转染至A549和MDCK细胞中,经Western blotting和间接免疫荧光鉴定后,用流感病毒进行感染,通过检测半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50)和空斑实验确定病毒滴度;使用不同初始感染剂量,绘制动态的病毒生长曲线,以确认hA3F和hA3G对流感病毒复制的影响.Western blotting检测流感病毒感染后转染细胞表达外源性hA3F和hA3G的情况.病毒在转染细胞和对照细胞中连续传代,RT-PCR和测序分析其血凝素HA基因的突变频率.结果:TCID50检测和空斑实验结果表明在hA3F和hA3G表达细胞中,流感病毒的滴度与对照细胞间差异无统计学意义(P>0.05);病毒生长曲线表明,不同初始感染剂量、不同感染时相,转染hA3F和hA3G的细胞对人流感病毒的抑制作用与对照细胞间的差异无统计学意义(P>0.05).Western blotting结果表明感染后48 h仍能够在MDCK细胞中检测到hA3F和hA3G的重组蛋白.病毒HA片段的测序分析表明,转染hA3F和hA3G的细胞对流感病毒基因组的致突变频率与埘照细胞间的差异无统计学意义(P>0.05).结论:本研究表明hA3F和hA3G这两个重要的APOBEC成员,对人流感病毒的复制效率及突变频率无明显作用.

关键词：APOBEC-3F、APOBEC-3G、流感病毒、复制、突变、A549

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分类号：R373.1;Q939.4(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金项目30771988,30571674;广东省自然科学基金9451503102003499;广东高校优秀青年创新人才培育项目LYM08056.高校博士点专项科研基金20094402110004

在线出版日期：2010-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：346-351