定点诱变法构建p53基因多态质粒

摘要：

目的:为了研究p53 codon 72多态的功能,采用定点诱变法构建人p53基因的多态质粒.方法:设计带有突变碱基的引物,通过PCR扩增引入突变碱基,再将突变后的p53序列插入载体中.经测序确定所扩增的DNA序列,并用体外转录翻译系统制备p53蛋白和iASPP蛋白,免疫沉淀法检测蛋白相互作用.结果:通过PCR获得的含突变碱基的p53序列经连接后插入真核表达载体pReceiver-M01中,构建了p53多态位点为72Arg的表达质粒pReceiver-M01-p53(Arg72).测序证明序列正确,表达的p53蛋白能与iASPP相互作用,具有生物学功能.结论:成功构建了p53多态(72Arg)真核表达载体,为进一步深入研究p53多态的生物学功能奠定了基础.

关键词：p53多态、定点诱变、重叠延伸PCR

所属期刊栏目：22

分类号：Q781(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30971140;重庆市科委自然科学基金资助项目CSTC,2008BA5003

在线出版日期：2010-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：182-185