负链RNA病毒反向遗传通用载体的构建与鉴定

摘要：

目的:用于负链RNA病毒的重组技术称为反向遗传技术,其核心需要构建一个具有双向启动子的反向遗传通用载体,可以分别正向转录翻译病毒复制所需酶系和负向转录病毒负链RNA.为此,构建负链RNA病毒反向遗传通用的载体.方法:为提高转染和表达效率,首先改造peDNA3载体,通过酶切删除peDNA3载体中非必需序列,在保留Amp抗性的前提下,通过酶切去除peDNA3载体中非必需的Kan抗性表达盒与CMV启动子前区.利用长引物合成含有反向pol I启动子与多克隆位点的基因片段.将合成后的片段酶切、补平粘端、连接,反向插入至经改造后的pcDNA3载体中,构建反向遗传通用表达载体.采用PCR检测、酶切鉴定以及DNA测序进行验证.结果:PCR检测、酶切鉴定以及DNA测序结果表明,载体构建正确,合成及插入序列与预期设计完全一致.结论:成功构建具有CMV与pol I双向启动子的反向遗传通用载体,为建立负链RNA病毒反向遗传平台提供了研究基础.

关键词：反向遗传、RNA病毒、载体

所属期刊栏目：22

分类号：R373.1;Q939.4(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30771988,30972766;广东省自然科学基金8151503102000022,9451503102003499;高等学校博士学科点专项科研基金20094402110004;广东高校优秀青年创新人才培育项目LYM08056;农业微生物学国家重点实验室开放课题AML200910

在线出版日期：2010-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：175-178