苦瓜MAP30基因功能性片段的克隆和表达

摘要：

背景与目的:MAP30是一种具有抗肿瘤、抗HIV和抗病毒等功能的蛋白.通过克隆和表达该蛋白的核心片段,用于进一步研究基因功能和结构域之间的关系.材料与方法:设计了两对特异性的引物,通过PCR技术从苦瓜总DNA中分别扩增出两段含有成熟MAP30蛋白基因的功能性片段T8-S194和T8N263,然后将目标基因克隆到原核表达载体pET-28a上,构建成带有C端6His-tag的融合表达载体,经测序鉴定后用CaCl2介导的化学转化法转化到E.coli RosettaTM(DE3)pLysS中.利用PCR筛选出阳性克隆,经IPTG诱导工程菌表达出重组蛋白.通过Western blot对重组蛋白进行分析. 结果:含T8-S194和T8-N286基因片段的两个表达载体构建成功,它们的表达重组蛋白能与兔抗His-tag多克隆抗体发生特异性反应.结论:构建的两个含目的基因的表达载体均能在E.coli RosettaTM(DE3)pLysS中表达出预期的重组蛋白,为进一步研究这两个重组蛋白打下了基础.

关键词：苦瓜、克隆、原核表达、MAP30、活性片段

所属期刊栏目：19

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广东省高校自然科学基金Z02036

在线出版日期：2007-08-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：285-289