MTS1基因β启动子E2F1结合位点序列突变重组质粒的构建与表达

摘要：

目的:深入研究MTS 1基因β启动子的转录激活与E 2 F 1转录因子的相互作用关系,阐明该基因转录水平的调控机制. 方法:用PCR定点突变方法或酶切连接法,构建β启动子0.38 kb SacⅡ-SacⅠ酶切片段中E 2 F 1 A、 B、 C任意2个位点或3个位点均突变的pGL 3重组质粒.用脂质体介导的基因瞬时转染法,将构建的重组质粒转染MTS 1基因双等位缺失的急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞,检测pGL 3重组质粒中荧光素酶报告基因的表达. 结果:构建的E 2 F 1 A、 B、 C结合位点突变的重组质粒经SacⅠ或NaeⅠ酶切鉴定和DNA序列分析得到证实.与E 2 F 1位点野生型重组质粒比较,突变型重组质粒在Jurkat细胞中荧光素酶报告基因的表达量减少,以3个位点均突变的重组质粒为明显. 结论:构建的E 2 F 1 A、 B、 C 2个或3个结合位点均突变重组质粒成功,可通过基因转染用于研究MTS 1基因的功能试验中;MTS 1基因β启动子的转录活性可能与E 2 F 1转录因子的反式激活有关.

关键词：MTS 1基因、E 2 F 1转录因子、基因突变

所属期刊栏目：15

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：重庆市卫生局资助项目992036

在线出版日期：2004-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：5-9