pcEgr-IFNγ重组质粒的构建与体外X射线诱导表达特性

摘要：

目的:扩增小鼠IFNγcDNA全长并构建pcEgr-IFNγ重组质粒,研究该重组质粒在不同剂量X射线作用下在B16细胞中的表达及时程.方法:利用PCR方法扩增小鼠IFNγcDNA全长,插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点,用Egr-1的启动子替代pcDNA3.1质粒的CMV启动子,构建成pcEgr-IFNγ重组质粒;通过脂质体转染法将重组质粒转染入B16细胞,利用ELISA试剂盒检测在不同剂量X射线作用下,重组质粒的表达量及表达时程.结果:IFNγcDNA的扩增产物经测序,结果基本与已知序列相符,重组质粒经酶切鉴定,得出相应的特异带.不同剂量X射线照射后,pcEgr-IFNγ在B16细胞中表达量为77.73～94.60pg / ml,明显高于对照组(P<0.05 ～ P<0.01);2GyX射线照射后6h,pcEgr-IFNγ表达量最高,为90.00pg / ml,明显高于对照组(P<0.001).结论:用本实验克隆的IFNγcDNA所构建的pcEgr-IFNγ重组质粒,经X射线的诱导,在被转染的B16细胞中表达量明显增高.对重组质粒X射线诱导表达的剂量时程的检测,为将来pcEgr-IFNγ基因治疗合并放疗的体内研究奠定了基础.

关键词：IFNγ表达、PCR、质粒构建、X射线照射、时程、剂量效应

所属期刊栏目：15

分类号：R146(放射卫生)

资助基金：国家自然科学基金39970229

在线出版日期：2004-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1-4