94. BPD致XEM2细胞DNA加合物水平的检测

摘要：

随着我国工矿企业的发展，人口密集的工业城市不断扩建，交通运输车辆与燃料的消耗量日益增加，因而环境中苯并（a)芘（B(a）P）与其他多环芳烃（PAH）的污染也日趋严重。早在1983年国际癌症研究机构就将B(a)P列为人类致癌物。BPD（Benzo（a）pyrene-7，8-trans-dihydroxy-diol）是B（a）P的代谢产物，此种衍生物再经混合功能氧化酶的催化形成二氢二醇环氧苯并（a)芘（BPDE），它可以与DNA的亲核位点鸟嘌呤外环胺基端共价结合，形成DNA加合物。本试验用不同浓度的BPD对能够表达CYPIAI的V79细胞的衍生株XEM2细胞染毒3 h，之后提取细胞DNA，用改良的核酸酶PI富集的 32P-后标记法测定DNA加合物。其主要步骤为：①在含有加合物的DNA中加入牛脾磷酸二酯酶与微球菌内切酶，使DNA链完全降解为3’单磷酸核苷；②加入核酸酶PI，它可选择性地作用于正常未结合外来化合物的单核苷酸3’-OH末端，使之去磷酸化，而与外来化合物形成加合物的单核苷酸可抵制这一作用，这样可以通过消除正常核苷酸来富集加合物核苷酸；③再在反应体系中加入特异的-32P-ATP多聚核苷酸激酶（T4PNK），将具有高度特异活性的 32P-ATP的磷酸根基因转移到加合的核苷酸5’-OH末端，使其形成3’，5’二磷酸核苷，而已去磷酸化的单核苷酸则不能；④将标记的加合物通过薄层层析技术分离；⑤放射自显影确定各加合物在PEI-cellulose层析板上的位置；⑥定量分析以液闪仪进行CPM计算，计算加合物水平。

机标关键词：细胞染毒、加合物、单核苷酸、去磷酸化、外来化合物、混合功能氧化酶、核酸酶、磷酸二酯酶、放射自显影、二磷酸核苷、多聚核苷酸、运输车辆、衍生、完全降解、人口密集、可选择性、技术分离、计算、基因转移、共价结合

所属期刊栏目：13

分类号：R994.6(毒物学（毒理学）)

在线出版日期：2004-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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