93. 细胞色素P450 2E1在人鼻咽部的表达及体外表达模型的建立

摘要：

细胞色素P4502E1是细胞色素P450（CYPs）超家族的主要成员之一，参与内源性固醇类、脂肪酸和外源性的药物、酒精及化学致癌物的代谢。亚硝胺是一类环境中广泛存在的间接致癌物，它在体内的代谢活化主要由CYP2E1介导。本室早些时候曾应用二亚硝基哌嗪（DNP）体外诱导人胚鼻咽上皮细胞恶性转化获得成功，因此推测在鼻咽部可能存在DNP的代谢活化酶。本文采用RT-PCR对8例人胚鼻咽上皮细胞（HENE）、1例恶性转化鼻咽细胞系(7429）、5例鼻咽癌细胞系（CNE1、CNE2、HNE1、HNE2、HNE3）和10例鼻咽癌（NPC）活检组织CYP2E1表达检测后，结合Western blot对CNE2的CYP2E1表达分析，首次发现了CYP2E1在鼻咽组织的表达。同时，发现200 μg/ml～300 μg/ml DNP能使CYP2E1 cDNA在HENE细胞表达明显增强。这些结果提示CYP2E1可能在DNP诱发的正常人胚鼻咽上皮细胞恶性转化中起作用。基于CYP2E1在化学致癌物遗传毒理学中的重要作用，为进一步对其肿瘤发生相关功能研究的需要，我们采用基因重组的方法构建了人CYP2E1 cDNA真核表达载体pcDNA3.1-2E1，经脂质体Lipofectamine介导分别转入NIH3T3和CNE2细胞系，通过G418筛选后随机挑选若干抗性克隆扩大培养，建成稳定传代的转染细胞株。利用PCR和Southern blot对各转染细胞克隆外源基因整合情况进行了鉴定，结果显示有4个克隆NIH3T3-A4、NIH3T3-A8、CNE2-R12、CNE2-R18呈Southern杂交阳性，且经RT-PCR及Western blot分别证实了外源基因的稳定表达。说明人CYP2E1 cDNA真核表达细胞株的建立成功。用乙醇及DNP分别对此模型进行诱导后的表达检测发现CYP2E1蛋白水平的增加主要与mRNA水平增高有关，可能是二者介导了CYP2E1的转录活化或mRNA的稳定。可以预见，CYP2E1 cDNA真核表达细胞株的建立将为CYP2E1相关的化学致癌机制的阐明打下坚实基础。

机标关键词：细胞色素、鼻咽部、人胚鼻咽上皮、真核表达载体、细胞恶性转化、上皮细胞、化学致癌物、细胞株、细胞系、外源基因整合、代谢活化、表达检测、细胞克隆、二亚硝基哌嗪、鼻咽癌、遗传毒理学、间接致癌物、转染、转录活化、肿瘤发生

所属期刊栏目：13

分类号：Q344;R739.7(遗传学分支学科)

在线出版日期：2004-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：262-263